판매한 회사는 거의 다 있습니다.브로멜라인 효소 분말파파인과 혼합되어 있습니다.브로멜라인을 5000GDU/g으로 정제하는 것은 어렵습니다. 그러나 파파인을 1000,000GDU/g로 정제하는 것은 매우 쉽습니다. 2000,000GDU/g까지. 그러나 브로멜라인의 기능은 파파인과 다릅니다. 색상, 냄새, 수용성 및 맛이 가품 및 진품과 대조됩니다. 차이점은 바로 브로멜라인 효소 분말이 회색이고 무취이며 무미이며 물에 녹지 않는다는 것입니다.
그러나 거짓 브로멜라인에는 다음과 같은 특징이 있습니다.
● 담황색이며 향이 있고 순한 단맛이 나며 수용성이다. 파파인의 특징입니다.
● 염증을 가라앉히고 통증을 완화시키는데 사용된다. 그러나 파파인에는 이러한 기능이 거의 없습니다.
● 식품첨가물이 아닌 식이보충제로만 사용되며 실제로 제약 등급이 될 수 있습니다. 그러나 파파인은 고기 연화제 분말과 화장품으로만 사용됩니다.
우리는 SDS-PAGE 겔과 GELATIN DIGESTION UNIT ANALYTICAL 및 HPLC 방법에 따라 브로멜라인을 테스트했으며 SDS-PAGE 겔 방법에서 가짜 제품에 대한 표적 분자가 적습니다.
다음은 SDS Page 전기영동 결과입니다.
위의 반점은 그림의 올바른 위치에 올바른 제품에만 동일한 반점이 있지만 가짜 제품에는 작은 반점이 있으므로 분자량이 거의 보이지 않습니다.
Bromelain의 분자량은 약 33000이지만 Papain의 분자량은 21000입니다. 그리고 HPLC 크로마토그램:
올바른 추출물만이 올바른 분자량의 브로멜라인을 포함하고 HPLC로 검출할 수 있음을 알 수 있습니다.
그러나 Gelatin Digestion Unit Analytical Method(GDU)로만 테스트한 경우 Annex II를 참조하십시오. 올바른 제품과 잘못된 제품 모두 아래와 같은 결과를 가집니다.
파인애플 줄기는 매우 저렴하고 줄기에서 브로멜라인으로의 비율은 매우 낮으며 제조 공정에서 약간의 오염이 있습니다.
거의 모든 브로멜라인 효소 분말 공장이 근처에 있습니다. 그들은 신선한 줄기를 사용합니다. 스템을 장거리로 배송하는 것은 불가능합니다. 원재료는 산지에서 채취할 때 가능한 빨리 처리하거나 단백질 분해를 피하기 위해 저온 환경(4-8도)에 보관해야 합니다. 실제로 제조업체는 파인애플 줄기가 너무 많아 위의 두 가지 조건 중 어느 것도 실제로 충족할 수 없습니다. 합리적인 방법은 처리 시간과 단백질 활성 손실 사이의 균형입니다. 통상 파인애플 수확기에 원재료를 제조하여 저온환경(4-8도)에서 원재료를 보관합니다.
우리는 SDS Page 전기영동에 대해 몇 가지 테스트를 하고 있습니다. 이론상 10,000 또는 20,000까지 높일 수 있지만 매우 비쌉니다. 5000GDU/g이며 말토 지원/마이크로캡슐화 또는 유기농 등급 추출/정제에서 안정적으로 만들 수 있습니다.
부속서 I
● 방법 5 SDS 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)
SDS-PAGE는 변성 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동법입니다. 이 방법의 단백질 분리 원리는 대부분의 단백질이 음이온성 계면활성제 SDS(sodium dodecyl sulfate)와 중량비로 결합하여 복합체를 형성할 수 있다는 사실에 기반합니다.
단백질 분자에 의해 운반되는 음전하는 천연 단백질 분자의 순 전하를 훨씬 초과하여 다른 단백질 분자의 전하 효과를 제거하고 분자 크기에 따라 단백질을 분리합니다.
이 방법은 단백질의 정성적 동정, 순도 및 불순물 관리, 정량적 정량에 사용됩니다.
1 악기 장치
정전압 또는 정전류 전원 공급 장치, 수직 판 전기 영동 탱크 및 접착제 제조 금형.
2. 시약
(1) 물.
(2) 분리 젤 버퍼(4x, 용액 A) 1.5mol/L 트리하이드록시메틸 아미노메탄 염산 버퍼. 트리히드록시메틸아미노메탄 18.15g을 달아 적당량의 물에 녹인다. 염산으로 pH 값을 88로 조정하고 물로 100ml로 희석합니다.
(3) 아크릴아미드 58.0g 및 N,N'-메틸렌비스아크릴아미드 20g을 30% 아크릴아미드용액(B용액)에 달아 미지근한 물에 녹여 200ml로 한 후 여과지로 여과(보관) 어두운).
(4) 10% SDS용액(C용액)에 황산도데실나트륨 10g을 달아 물에 녹여 100ml로 한다.
(5) 테트라메틸에틸렌디아민 용액(TEMED, D 용액)의 상품화 시약.
10% 과황산암모늄용액(E용액) 과황산암모늄 10g을 달아 물에 녹여 100ml로 한다. 사용 전 미리 준비하거나 -20도에서 2주 동안 따로 보관하는 것이 좋습니다.
(7) 농축고무완충액(4×, F용액)0.5mol/L 트리히드록시메틸아미노메탄 염산완충액, 트리히드록시메틸아미노메탄 6.05g을 달아 적당량의 물을 넣어 녹이고 염산으로 pH를 6.8로 조정한다. 산, 물로 희석하여 100ml로 한다.
(8) 전극완충액(10×) 트리메틸아미노메탄 30g, 글리신 144g, 황산도데실나트륨 10g을 달아 물에 녹여 약 800ml로 한다. 염산으로 pH를 8.1-8.8로 조정하고 물을 넣어 1000ml로 희석한다.
(9) 무환원시료완충액(4×) 트리메틸아미노메탄 303g, 브로모페놀블루 20mg, 황산도데실나트륨 8.0g을 달아 글리세롤 40ml를 달아 물에 녹여 약 80ml로 한다. 염산으로 pH를 68로 조절하고 물을 넣어 100ml로 희석한다.
(8) 전극완충액(10×) 트리메틸아미노메탄 30g, 글리신 144g, 황산도데실나트륨 10g을 달아 물에 녹여 약 800ml로 한다. 염산으로 DH값을 81-88로 조정하고 물로 1000ml로 희석한다.
(9) 무환원시료완충액(4×) 트리메틸아미노메탄 3.03g, 브로모페놀블루 20mg, 소듐도데실설페이트 80g을 달아 글리세롤 40ml를 계량하여 물에 녹여 약 80ml로 한다. 염산으로 pH를 6.8로 조절하고 물을 넣어 100ml로 희석한다.
(10) 환원시험물질완충액(4 ×) 트리메틸아미노메탄 3.03g, 브로모페놀블루 20mg 및 황산도데실나트륨 80g을 달아 글리세롤 40ml를 계량하여 녹이고 물을 넣어 약 80ml로 한 후 가한다. - 20ml 메르캅토에탄올, 염산으로 pH 6.8로 조정, 물로 100ml로 희석(또는 트리메틸아미노메탄 3.03g, 브로모페놀블루 20mg, 도데실황산나트륨 8.0g, 글리세롤 40ml을 측정, 물에 녹이고 희석) 80ml로 하고, 염산으로 pH를 6.8로 조정하고, 물을 넣어 100ml로 희석하고, 디티오트레이톨을 100mmol/L가 되도록 첨가하여 사용한다.
● 부록 II
젤라틴 분해 단위 분석 방법(GDU)
가. 목적 : Bromelain Enzyme Powder의 단백질 분해 활성을 측정하기 위한 방법이다.
B. 장비:
1. pH 측정기
2. 45.0도 ± 0.1도의 항온 수조
3. 분석수지
4. 부피 플라스크
5. 체적 피펫
6. 타이머
7. 디지털 뷰렛(0.1 ml의 정확도)
8. 흄 후드
9. 자동 피펫터
C. 안전 예방 조치:
이 테스트는 흄 후드에서 수행해야 합니다.
1. 표준 실험실 안전 관행을 활용합니다.
2. 포름알데히드: 항상 흄 후드에 준비하고 보관하십시오. 알려진 발암 물질 및 기형 유발 물질.
3. 과산화물: 강산화제
D. 시약 및 시약 준비:
1. 증류수: 약 500ml: 0.1N HCl로 pH 4.5로 조정한다.
2. 젤라틴 기질:
ㅏ. 뜨거운 물 375ml에 젤라틴(Mikrobiologie. 1.04070) 25g을 녹이고 끓입니다. 45도까지 식힙니다.
비. 0.1N HCl로 pH를 4.5로 조정하고 pH 4.5 증류수 500ml로 희석합니다.
씨. 젤라틴 기질을 45도에서 유지하십시오.
3. 버퍼 솔루션:
ㅏ. 150ml 비이커의 40-50ml 물에 15gm NaCl을 천천히 넣고 저어 녹입니다.
비. 0.570ml 아세트산을 추가합니다.
씨. 0.2N HCL을 사용하여 pH를 4.5로 조정합니다(부피가 100ml보다 커짐).
4. 3% 과산화수소:
ㅏ. 30% 과산화수소(원액) 2.5ml를 25ml 메스 플라스크에 피펫으로 넣고 pH 4.5 증류수로 희석합니다.
5. 37% 포름알데히드 pH 9.0: a. 포름알데히드의 충분한 부피(100 ml)를 0.1N NaOH(pH 조정 전 샘플당 약 20ml의 포름알데히드)로 pH 9.0으로 조정합니다.
젤라틴 소화 장치 분석 방법(GDU) - 계속
6. 0.100 N NaOH: (표준화 구매) a. 원액: 0.100N으로 표준화
E. 절차:
1. 효소 준비:
ㅏ. 효소 준비 계산
체중{0}}/목표 활동(약 0.05g 또는 50mg)
A. 50ml 메스 플라스크에 효소의 무게를 정확히 잰다.
B. 완충액 8.3ml를 첨가한다.
비. 실온에서 30분간 방치합니다.
C. pH 4.5 증류수를 사용하여 50ml로 희석하고 작은 교반 막대를 추가하고 추가로 10~15분 동안 교반합니다.
2. 효소 절차:
ㅏ. 젤라틴 기질 25ml를 교반 막대가 들어 있는 두 개의 100ml 비이커 각각에 피펫으로 넣고 45도에서 5분 동안 수조에 두어 하나는 테스트 용액으로, 다른 하나는 블랭크 용액으로 넣습니다.
비. 테스트 솔루션:
1) 검액용 비이커에 브로멜라인효소분말용액 1.0ml를 넣고 타이밍을 맞춰 잘 저어준다.
2) 45도에서 정확히 20분 배양한 후 3% 과산화수소 0.1ml를 넣고 저어준다.
3) 추가로 5분간 인큐베이션합니다.
4) 수조에서 비이커를 꺼내고 계속 저으면서 pH 프로브를 삽입합니다.
5) 10초 후 pH를 기록(초기 pH)
6) 0.1N NaOH를 사용하여 pH 60으로 조정합니다. (약 2-4ml)
*참고: pH를 6으로 조정할 때0 pH 5.8에서 주의하십시오. pH는 천천히 증가하며 이 시점에서 NaOH를 조금만 추가하면 pH가 크게 증가합니다.
7) 계속 저으면서 pH 9.0의 37% 포름알데히드 10ml를 첨가한다.
8) 10초 1분 후 pH를 기록한다.
9) 0.1N NaOH로 pH 90로 적정합니다.
10) 적정 부피를 기록합니다.
이것은 테스트 역가 T입니다. c.
블랭크 솔루션: 블랭크 솔루션은 테스트 솔루션과 동시에 실행되어야 합니다. 이는 테스트 솔루션이 시작된 후 12분 후에 블랭크 솔루션 측정을 시작하여 수행됩니다. 이렇게 하면 블랭크 솔루션을 진행하기 전에 테스트 솔루션에 대한 분석을 완료할 시간이 생깁니다. 1) 공시액용 비이커에 3% 과산화수소 0.1ml를 넣고 휘젓는다.
2) 45도에서 정확히 20분 배양한 후 브로멜라인용액 1.0ml를 넣고 휘젓는다.
3) 추가로 5분간 인큐베이션합니다.
젤라틴 분해 단위 분석 방법(GDU) - 계속.
4) 수조에서 비이커를 꺼내고 계속 저으면서 pH 프로브를 삽입합니다.
5) 10초 후 pH를 기록(초기 pH)
6) 0.1N NaOH를 사용하여 pH 60으로 조정합니다. (약 2-4ml)*위의 참고 사항을 참조하십시오.
7) 계속 저으면서 pH 9.0의 37% 포름알데히드 10ml를 첨가한다.
8) 10초 1분 후 pH를 기록한다.
9) 0.1N NaOH로 pH 90로 적정합니다.
10) 적정 부피를 기록합니다. 이것은 빈 역가, B입니다.
F. 계산:
1. 정의: 1 젤라틴 소화 단위는 pH 4.5 또는 pH 5.5(GDU pH 4.5 또는 pH 5.5)의 표준 젤라틴 용액에서 45도에서 20분 동안 분해한 후 1mg의 아미노 질소를 유리시키는 효소의 양입니다.
GDU/g {{0}} (TB) x 14 x N x 50 Wt (g) 여기서: T=테스트 역가(ml 0.1 N NaOH) B=Blank titer (ml 0.1 N NaOH) N=표준화된 NaOH의 정상도(예: 0.100) Wt(g)=효소의 초기 중량
G. 테스트 매개변수:
1. 효소 제제를 약 0.001g/ml(1mg/ml)의 농도로 희석하거나 브로멜라인 효소 분말 농축액의 경우 약 1-2GDU/ml로 희석합니다. 방법의 정확성을 보장하기 위해 각 실행에서 기준 물질을 분석합니다.
Guanjie는 GDU 테스트 방법을 사용하여 대량 브로멜라인 분말을 제공합니다. 당사의 생산 공정은 CGMP 표준 작업장에서 운영되며 2개의 공장과 2개의 독립적인 실험실에서 3개의 생산 라인을 활용합니다. 제품에 대한 문의사항은 아래 연락처로 연락주시기 바랍니다.info@gybiotech.com.
